Рейтинг@Mail.ru
(495) 7-999-000 Адрес офиса
Корзина
DIA HIV-Ag/Ab

НАЗНАЧЕНИЕ

Набор предназначен для скрининговых и подтверждающих исследований сыворотки и плазмы крови человека на наличие антигена р24 ВИЧ-1 и суммарных антител (IgG, IgM, IgA) к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 методом иммуноферментного анализа.

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ

ВИЧ – трансмиссивная инфекция, которая преимущественно передается через сексуальные контакты ВИЧ-инфицированных особ, инфицированные продукты крови, недостаточно дезинфицированные медицинские инструменты, а также от матери к ребенку. Терминальная стадия ВИЧ-инфекции получила название «синдром приобретенного иммунодефицита» (СПИД), которая характеризуется тяжелым угнетением иммунитета.

Наиболее распространенными разновидностями вируса являются ВИЧ-1 и ВИЧ-2, которые гомологичны по аминикислотному составу на 40-60%. ВИЧ-1 подразделяется на 2 группы: М группу, включающей 9 субтипов (A-I) и О группу. ВИЧ-2 включает 5 субтипов.

В основе патогенеза заболевания лежит прогрессирующий иммунодефицит и развитие вследствие этого вторичных оппортунистических инфекций и опухолевых процессов. Поражение иммунной системы при ВИЧ-инфекции носит системный характер, проявляясь глубокой супрессией Т– и  В-звеньев клеточного иммунитета, что определяет клиническую картину заболевания.

Средства вакцинопрофилактики ВИЧ-инфекции отсутствуют. Существующие методы противовирусной терапии не обеспечивают излечения от СПИДа, они позволяют лишь повысить качество и продолжительность жизни больных. Поэтому на современном этапе развития эпидемии ВИЧ/СПИДа основная роль в ограничении распространения этого заболевания  принадлежит профилактическим мероприятиям, направленным на предупреждение инфицирования. Значительное место в комплексе таких мероприятий занимает ранняя и своевременная диагностика ВИЧ, в частности выявление антител к ВИЧ и вирусных антигенов в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Ранние антитела к основному коровому белку ВИЧ-1 – р24, продукту гена gag, определяются методом ИФА  на 3-6 неделе после заражения  приблизительно у 75% инфицированных лиц. Наиболее иммуногенными являются гликопротеины - продукты гена env: gp160, gp120 и gp 41, антитела к которым, как правило, появляются позднее и определяются у 98% инфицированных особ. Первыми появляются иммуноглобулины класса М к gag протеинам, которые циркулируют на протяжении виремии. Через 5-7 дней после появления специфических IgM начинают синтезироваться антитела класса G к белкам р24 и gp120. Свободный антиген р24 ВИЧ-1 появляется в крови раньше специфических антител, затем его концентрация снижается  и вновь  повышается в терминальной стадии заболевания, когда уровень нейтрализующих его антител снижается.

Для проведения скрининговых исследований крови на антитела к ВИЧ и вирусные антигены в настоящее время используют высокочувствительные иммуноферментные тест-системы 3-го и 4-го поколения. В них рекомбинантные полипептиды используют в составе твердой фазы и конъюгате, что позволяет выявлять суммарные антитела разных классов (IgM, IgG, IgA) и сокращает период сероконверсионного окна. Тест-системы 4-го поколения (комбинированные тесты) позволяют обнаруживать не только специфические антитела, но и антиген р24 ВИЧ-1, посредством введения в систему  моноклональных антител  к белку р24 ВИЧ-1. Такая конфигурация тест-системы повысила ее чувствительность и позволила выявлять ВИЧ в более ранние сроки, когда антитела к вирусу еще отсутствуют.

ПРИНЦИП АНАЛИЗА

Принцип анализа DIA®-HIV-Ag/Ab базируется на методе твердофазного ИФА в „сендвич” варианте с использованием биотин-стрептавидинового усиления специфического сигнала.

В составе иммуносорбента используются мышиные моноклональные антитела (МКАТ) к антигену р24 ВИЧ-1 и рекомбинантные антигены Еnv-1 ВИЧ-1 и Еnv-2 ВИЧ-2.

Конъюгат №1 состоит из смеси биотинилированных конъюгатов на основе МКАТ к р24 ВИЧ-1 и аналогов вирусных антигенов Еnv-1 и Еnv-2.

При внесении в лунки планшета образцов сывороток ВИЧ инфицированной крови и конъюгата №1 антиген р24 ВИЧ-1 связывается с моноклональными антителами к р24 ВИЧ-1 в составе иммуносорбента и биотинилированного конъюгата. Специфические антитела взаимодействуют одновременно с антигенами Еnv-1 и Еnv-2  в составе иммуносорбента и биотинилированных конъюгатов. Образовавшиеся иммунные комплексы антиген-антитело выявляются пероксидазным конъюгатом стрептавидина (конъюгат №2). Специфические антитела, не прореагировавшие с биотинилированными конъюгатами, выявляются пероксидазными конъюгатами антигенов Env-1 и Env-2 в составе конъюгата №2 (для предотвращения «хук-эффекта»).

После отмывания несвязанных компонентов в лунки добавляют раствор проявителя. Пероксидазную реакцию останавливают, добавляя стоп-реагент, и измеряют оптическую плотность смеси в лунках при длине волны 450/620 нм. Интенсивность окрашивания в лунках определяется присутствием  специфических антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 или антигена р24 ВИЧ-1.

Каталог ифа тест-систем