Рейтинг@Mail.ru
(495) 7-999-000 Адрес офиса
Корзина
Эволюция ифа

Более 25 лет проблема распространения вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) продолжает оставаться актуальной для всего мирового сообщества.  Своевременное выявление ВИЧ-инфекции, внедрение новых и усовершенствование существующих методов диагностики  остается основным направлением при проведении  мероприятий по предотвращению распространения данного заболевания.

Скрининговые исследования на выявление ВИЧ-инфекции проводятся с использованием серологических методов, в основном, иммуноферментного анализа (ИФА). За последние 30 лет произошла трансформация тест-систем для диагностики ВИЧ-инфекции от тест-систем 1-го и 2-го поколения, предназначенных для выявления вирус-специфических IgG; через тест-системы 3-го поколения, выявляющих суммарные вирус-специфические антитела; к тест-наборам 4-го поколения, предназначенных для одновременного выявления антигена р24 ВИЧ-1 и антител к (и  IgG, IgM, IgA ) ВИЧ1/2.  

Одним из основных направлений работы предприятия ЧАО «НПК «Диапроф-Мед» (Киев, Украина) является разработка иммуноферментных тест-систем для диагностики вирусных заболеваний, в том числе ВИЧ1/2.

«DIA-HIV ½» - тест-набор 3-го поколения, основу которого положено использование высокоочищенных специфических рекомбинантных белков в составе иммуносорбента и иммуноферментного кон’югата.

«DIA-HIV-Ag/Ab» (шестая версия) - тест-набор 4-го поколения, предназначеный для скрининговых исследований на выявление ВИЧ-инфекции. В основу диагностикума положено использование  рекомбинантных белков – аналогов  антигенов ВИЧ-1(gp120, gp41) и ВИЧ-2 (gp36); и моноклональных антител к р24 ВИЧ-1.

«DIA-HIV-Ag/Ab» (восьмая версия) - тест-система повышенной чувствительности 4-го поколения, отличительной особенностью  которой является использование сочетания полноразмерных и укороченных рекомбинантных и синтетических ВИЧ1/2-специфических антигенных конструкций в составе иммуносорбента и иммуноферментного конъюгата, а также введение мощной системы биотин-стрептавидинового усиления специфического сигнала.  

В Табл. 1 представлены  результаты исследования параметра чувствительности тест-систем разной конфигурации на сероконверсионной панели PRB 965.

Таблица 1

Результаты исследования чувствительности тест-систем “DIA-HIV ½ “, “DIA-HIV Ag/Ab” и “DIA-HIV Ag/Ab-sensitive” на панели PRB 965.

№ образца

День забора крови

Значение ОП/ГЗ

Иммуноблот

DIA-HIV ½٭

DIA-HIV Ag/Ab (6)

DIA-HIV Ag/Ab(8)٭

Elecsis HIV Ag

белки

1

0

0,51

0,36

0,28

0,27

отр

2

5

0,48

0,95

1,36

1,58

отр

3

7

0,64

1,03

1,59

2,11

отр

4

12

21,9

8,21

10,84

3,01

gp160

5

14

22,3

12,4

15,97

1,65

gp160

6

21

23,1

15,2

13,54

0,68

gp160, gp120, p24

Примечание: ОП – оптическая плотность, ОП/ГЗ – соотношение оптической плотности к граничному значению;

٭ данные контрольных испытаний тест-систем в Институте Пауля-Эрлиха (Германия)

Согласно полученным данным, тест-система «DIA-HIV ½» выявляет антитела, начиная с на 12 день забора крови. Тест-система “DIA-HIV Ag/Ab”(6) выявляет антиген р24 ВИЧ, начиная с 7 дня забора крови, а набор “DIA-HIV Ag/Ab” (8) уже на 5 день.

Аналитическую чувствительность 6-й и 8-й версий тест-системы “DIA-HIV-Ag/Ab”  определяли с использованием 1-го Международного стандарта р24 ВИЧ-1 (NIBSC, Великобритания) и контрольного образца р24 ВИЧ-1  (ABI, США) (табл.2).  

Как видно из полученных данных тест-система “DIA-HIV-Ag/Ab” (8) выявляет антиген р24 в концентрации 2,5 пкг/мл или 1МЕ, в то время, как “DIA-HIV-Ag/Ab” (6) – в концентрации 10 пкг/мл или 2МЕ. Повышение параметра аналитической чувствительности 8-й версии тест-системы, очевидно, связано с использованием биотинилированного конъюгата высокоаффинных моноклональных антител и мощного стрептавидинового усиления.

Таблица 2

Определение аналитической чувствительности  тест-системы DIA-HIV-Ag/Ab” (6) и DIA-HIV-Ag/Ab” (8) по выявлению антигена р24 ВИЧ-1 с использованием стандартов ABІ и NIBSC

Стандарт ABI

Стандарт NIBSC

пкг/мл

ОП/ГЗ

“DIA-HIV Ag/Ab” (6)

ОП/ГЗ

“DIA-HIV Ag/Ab” (8)

МЕ

ОП/ГЗ

“DIA-HIV Ag/Ab” (6)

ОП/ГЗ

“DIA-HIV Ag/Ab” (8)

5,5

40

2,8

4,2

8

2,87

3,6

20

1,7

3,5

4

1,9

2,6

10

1,1

1,8

2

1,2

1,72

5

0,9

1,25

1

0,8

1,1

2,5

0,4

5,5

0,5

0,45

0,56

Для определения параметров чувствительности и специфичности тест-систем разных конфигураций производства НПК «Диапроф-Мед» были использованы положительные сыворотки от ВИЧ-инфицированных пациентов и сыворотки доноров, не содержащие ВИЧ-специфических антител и антигена р24 ВИЧ-1. Чувствительность всех тест-систем составила 100%, специфичность для тест-систем “DIA-HIV ½ “ – 99,6%, “DIA-HIV Ag/Ab”(6) – 99,7% и  “DIA-HIV Ag/Ab”(8) – 99,8%. Повышенный параметр специфичности тест-системы “DIA-HIV Ag/Ab”(8) можно связать с введением в растворы конъюгатов укороченных рекомбинантных и синтетических ВИЧ1/2-специфических антигенных конструкцій.

Для облегчения работы лаборантов, тестирующих образцы сывороток, а также для снижения влияния человеческого фактора на результаты тестирования сотрудники ЧАО «НПК «Диапроф-Мед» приступили к разработке новой версии тест-систмы, предназначенной для диагностики ВИЧ-1/2. Принцип тестирования заключается в том, что в лунки полистиролового планшета внесены все компоненты диагностикума и лиофильно высушены. Лаборанту остается внести в лунки образцы сывороток и конъюгат стрептавидиновый. Первичное тестирование такой конфигурации тест-системы продемонстрировало достаточно высокую стабильность приготовленного таким образом планшета, а также высокие показатели чувствительности и специфичности при исследовании образцов крови.