Тест-система для выявления антигена p24 ВИЧ-1 и антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2
Распространение ВИЧ инфекции приобрело характер глобальной катастрофы. Около 33,3 млн. человек в мире инфицировано ВИЧ, среди них 15,9 млн. женщин и 2,5 млн. детей до 15 лет [1]. Своевременное выявление ВИЧ, внедрение новых, усовершенствование существующих методов диагностики остается основным направлением по предотвращению распространения ВИЧ.
При скрининговых обследованиях населения на ВИЧ используют иммуноферментный анализ (ИФА). В тест-системах III и IV поколений рекомбинантные полипептиды используются в составе иммуносорбента (твёрдой фазы) и конъюгата, что позволило выявлять суммарные антитела (АТ) разных классов (IgG, IgM, IgA) и сократило серологическое окно. Тест-системы IV поколения (комбинированные) позволяют выявлять не только специфические АТ, но и антиген р24 ВИЧ-1 (АГ) посредством введения в систему моноклональных антител (МКАТ) к белку р24 ВИЧ-1 [5], что повышает чувствительность тест-системы и позволяет выявлять ВИЧ на ранних сроках, когда АТ к нему отсутствуют.
Тестирования коммерческих ВИЧ-сероконверсионных панелей сывороток производства Boston Biomedica Inc и ZeptoMetrix Corp. (США) различными тест-системами показывает, что чувствительность комбинированных ИФА-тестов приближается к показателю ПЦР анализа.
Широкое использование комбинированных тестов в службе крови делает актуальной задачу их дальнейшего совершенствования. Разработчики и производители постоянно исследуют новые подходы дальнейшего улучшения параметров чувствительности и специфичности комбинированных тестов.
Тест-система DIA-HIV Ag/Ab для одновременного определения АТ к ВИЧ ½ и АГ р24 ВИЧ-1 содержит полноразмерные рекомбинантные белки ВИЧ ½ и укороченные синтетические АГ, а также мощную систему биотин-стрептавидинового усиления с применением полимерной пероксидазы в составе конъюгата. Тест-система разработана российскими и украинскими учёными, выпускается в промышленных объёмах с 2011 года. Тест-система имеет регистрационное удостоверение Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения ФСЗ 2012/1336 от 30 ноября 2012 года.
С целью изучения характеристик разработанной тест-системы исследованы- положительные сыворотки от ВИЧ-инфицированных больных (837 образцов), полученные из областных центров СПИДа Украины;
- сыворотки доноров из областных станций переливания крови (2487 образцов), не содержащие маркёров ВИЧ;
- 1-й Международный стандарт АГ р24 ВИЧ-1 (HIV-1 p24 antigen, NIBSC, Великобритания);
- контрольный образец АГ р24 ВИЧ-1 (HIV-1IIIB p24 gag) – очищенный вирусный белок (ABІ, США);
- 1-я Международная референс-панель 02/210 (1-st International reference panel for anti-HIV), содержащая образцы плазмы крови с АТ к разным субтипам и группам ВИЧ (NIBSC, Великобритания);
- «Стандарт АГ(+) ВИЧ-1 р24 МБА» – панель сывороток крови человека, содержащих АГ р24 ВИЧ-1 в различных концентрациях (от 0,2 до 200 пкг/мл) для оценки качества ИФА тест-систем, используемых для выявления АГ р24 ВИЧ-1 (ООО «МедБиоАльянс», Россия).
- «Стандарт АТ(+) ВИЧ-1 МБА» – панель сывороток крови, содержащих АТ к ВИЧ-1 в различных концентрациях (ООО «МедБиоАльянс», Россия).
- «Стандарт АТ(+) ВИЧ-2 МБА» – панель сывороток крови, содержащих АТ к ВИЧ-2 в различных концентрациях (ООО «МедБиоАльянс», Россия).
- «Стандарт АТ(-) ВИЧ МБА» – панель сывороток крови, не содержащих АТ к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 (ООО «МедБиоАльянс», Россия).
- Сероконверсионные панели сывороток от ВИЧ-инфицированных пациентов - PRB 950, PRB 958, PRB 959 (BBI, США).
- Панель сывороток от ВИЧ-инфицированных пациентов, содержащая АГ р24 в разных титрах и АТ к ВИЧ - PRА 203 (BBI, США).
- Стандартная панель сывороток «СПП-ВІЛ ½», содержащая АТ к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в различных титрах (ЧАО НПК «Диапроф Мед», Украина).
- Стандартная панель сывороток «СПН-ВІЛ ½», образцы которой не содержат АТ к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, а также АГ р24 ВИЧ-1 (ЧАО НПК «Диапроф Мед» ,Украина).
Для установления достоверности полученных данных использованы показатели среднего арифметического результатов трёх повторов анализа исследуемых образцов в ИФА, стандартной ошибки и среднеквадратичного отклонения.
Тест-система DIA-HIV Ag/Ab, предназначена для скрининговых и подтверждающих исследований сывороток и плазмы крови человека на наличие АГ р24 ВИЧ-1 и суммарных АТ (IgG, IgM, IgA) к ВИЧ-1, ВИЧ-2.
Аналитическую чувствительность тест-системы определяли с использованием 1-го Международного стандарта р24 ВИЧ-1 (NIBSC), контрольного образца р24 ВИЧ-1 (ABI) (табл. 1) и «Стандарт АГ(+) ВИЧ-1 р24 МБА», содержащих различные концентрации АГ р24 ВИЧ-1 (ООО «МедБиоАльянс (Россия) (табл. 2).
Таблица 1: Аналитическая чувствительность «DIA-HIV-Ag/Ab» по выявлению АГ р24 ВИЧ-1
| Стандарт ABI | Стандарт NIBSC | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| Концентрация, пкг/мл | ОП | ОП/ГЗ | Концентрация, МЕ | ОП | ОП/ГЗ |
| 40 | 0,804±0,024 | 5,5±0,16 | 8 | 0,531±0,016 | 3,6±0,11 |
| 20 | 0,621±0,018 | 4,2±0,12 | 4 | 0,384±0,011 | 2,6±0,08 |
| 10 | 0,519±0,015 | 3,5±0,1 | 2 | 0,253±0,007 | 1,72±0,05 |
| 5 | 0,263±0,008 | 1,8±0,05 | 1 | 0,148±0,004 | 1,1±0,03 |
| 2,5 | 0,185±0,005 | 1,25±0,04 | 0,5 | 0,083±0,002 | 0,56±0,01 |
Примечание: ОП – оптическая плотность, ОП/ГЗ – соотношение оптической плотности к граничному значению, МЕ – международные единицы.
Аналитическая чувствительность тест-системы по выявлению стандарта р24 ВИЧ-1 ABІ составила 2,5 пкг/мл.
Таблица 2: Аналитическая чувствительность «DIA-HIV-Ag/Ab» на панели «Стандарт АГ(+) ВИЧ-1 р24 МБА»
| «Стандарт АГ(+) ВИЧ-1 р24 МБА» | |||||
|---|---|---|---|---|---|
| № образца (концентрация р-24 ВИЧ-1) | ОП | ОП/ГЗ | № образца (концентрация р-24 ВИЧ-1) | ОП | ОП/ГЗ |
| 1 (200пкг/мл) | 1,212±0,036 | 8,2±0,25 | 6 (5пкг/мл) | 0,097±0,03 | 0,6±0,02 |
| 2 (100пкг/мл) | 0,631±0,019 | 4,3±0,13 | 7 (2,5пкг/мл) | 0,069±0,02 | 0,4±0,01 |
| 3 (50пкг/мл) | 0,389±0,012 | 2,6±0,08 | 8 (1пкг/мл) | 0,047±0,01 | 0,3±0,01 |
| 4 (20пкг/мл) | 0,195±0,006 | 1,3±0,04 | 9 (0,5пкг/мл) | 0,048±0,01 | 0,3±0,01 |
| 5 (10пкг/мл) | 0,13±0,004 | 0,9±0,03 | 10 (0,2пкг/мл) | 0,057±0,01 | 0,4±0,01 |
Аналитическая чувствительность тест-системы по выявлению АГ р24 ВИЧ-1 составляет 20 пкг/мл.
Таблица 3: Чувствительность «DIA-HIV-Ag/Ab» на панели сывороток 02/210 (NIBSC)
| № образца панели | АТ к субтипам и группам ВИЧ | Результаты | |
|---|---|---|---|
| ОП | ОП/ГЗ | ||
| 1 | Анти-ВИЧ-1 субтип А группа М | 3,387±0,10 | 23,0±0,69 |
| 2 | Анти-ВИЧ-1 субтип В группа М | 3,565±0,11 | 24,2±0,72 |
| 3 | Анти-ВИЧ-1 субтип С группа М | 3,319±0,10 | 22,5±0,67 |
| 4 | Анти-ВИЧ-1 субтип Е группа М | 3,233±0,09 | 21,9±0,66 |
| 5 | Анти-ВИЧ-1 группа 0 | 1,098±0,03 | 7,5±0,22 |
| 6 | Анти-ВИЧ-2 | 3,195±0,09 | 21,7±0,65 |
| 7 | Отрицательный контроль | 0,063±0,002 | 0,42±0,012 |
Тест-система выявляет АТ к субтитам А, В, С и Е ВИЧ-1 группы М, АТ к ВИЧ-1 группы О и АТ к ВИЧ-2, причём показатели соотношения ОП/ГЗ достаточно высокие.
Таблица 4: Чувствительность «DIA-HIV-Ag/Ab» на панели сывороток «Стандарт АТ(+) ВИЧ-1 МБА»
| № образца панели | Результаты | № образца панели | Результаты | ||
|---|---|---|---|---|---|
| ОП | ОП/ГЗ | ОП | ОП/ГЗ | ||
| 1 | 3.196±0,096 | 20.2±0,606 | 9 | 3.14±0,094 | 20.1±0,603 |
| 2 | 3.374±0,101 | 21.3±0,639 | 10 | 3.372±0,101 | 21.3±0,639 |
| 3 | 3.476±0,104 | 22.0±0,66 | 11 | 3.418±0,102 | 21.9±0,657 |
| 4 | 3.231±0,096 | 20.8±0,624 | 12 | 3.136±0,094 | 20.0±0,600 |
| 5 | 3.375±0,101 | 21.3±0,639 | 13 | 3.326±0,099 | 21.3±0,639 |
| 6 | 3.399±0,102 | 21.4±0,642 | 14 | 3.344±0,100 | 21.4±0,642 |
| 7 | 3.296±0,099 | 21.2±0,636 | 15 | 3.342±0,100 | 21.4±0,642 |
| 8 | 3.659±0,109 | 23.1±0,693 | 16 | 3.416±0,102 | 21.9±0,657 |
Все образцы панели сывороток с АТ к ВИЧ-1 выявлены как положительные с высоким соотношением ОП/ГЗ (от 21,1 до 23.1). Аналогично выявляются позитивными все образцы панели сывороток «Стандарт АТ (+) ВИЧ-2 МБА».
Таблица 5: Оценка «DIA-HIV-Ag/Ab» на сероконверсионной панели сывороток PRB 950
| № образца панели | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| День забора крови | Abbott HIV1/2 | Organon Teknika HIV | Abbott HIV Ag | DIA-HIV-Ag/Ab | |
| PRB 950-1 | 0 | 0,2 | 0,3 | 0,5 | 0,4±0,012 |
| PRB 950-2 | 18 | 0,2 | 0,3 | 0,7 | 1,2±0,036 |
| PRB 950-3 | 21 | 0,2 | 0,3 | 3,3 | 5,9±0,177 |
| PRB 950-4 | 28 | 15,5 | 0,4 | 4,1 | 6,4±0,192 |
Чувствительность тест-систем «Abbott HIV1/2», «Organon Teknika HIV», «Abbott HIV Ag» приведена из паспортных данных панели.
Согласно паспорта на панель PRB 950, тест-система «Abbott HIV Ag» выявляет как положительные образцы 3 и 4, тест-система «Abbott HIV1/2» – только 4, тест-система «Organon Teknika HIV» не определяет ни один из образцов панели положительным. Тест-система «DIA-HIV-Ag/Ab» определяет как положительные образцы 2, 3, 4.
Таблица 6: Оценка «DIA-HIV-Ag/Ab» на сероконверсионной панели сывороток PRB 958
| № образца панели | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| День забора крови | Abbott HIV1/2 | Organon Teknika HIV | Abbott HIV Ag | DIA-HIV-Ag/Ab | |
| PRB-958-1 | 0 | 0,1 | 0,1 | 0,3 | 0,2±0,006 |
| PRB-958-2 | 2 | 0,0 | 0,1 | 0,2 | 0,1±0,003 |
| PRB-958-3 | 7 | 0,1 | 0,1 | 0,8 | 1,2±0,036 |
| PRB-958-4 | 9 | 0,1 | 0,1 | 2,1 | 4,5±0,135 |
| PRB-958-5 | 15 | 6,6 | 1,0 | 2,9 | 7,2±0,216 |
| PRB-958-6 | 17 | 13,0 | 2,6 | 3,3 | 12,2±0,366 |
Согласно паспортным данным в образцах 1 и 2 отсутствуют специфические АТ к ВИЧ и АГ р24 ВИЧ-1. Тест-система «DIA-HIV-Ag/Ab» определяет как положительные образцы панели, начиная с 3-го (7 день после первого забора крови). Тест-система «Abbott HIV Ag» определяет как положительные образцы панели, начиная с 4-го, остальные тест-системы – начиная с 5-го и 6-го образцов.
Таблица 7: Оценка «DIA-HIV-Ag/Ab» на сероконверсионной панели сывороток PRB 959
| № образца панели | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| День забора крови | Abbott HIV1/2 | Organon Teknika HIV | Abbott HIV Ag | DIA-HIV-Ag/Ab | |
| PRB-959-1 | 0 | 0,3 | 0,4 | 0,3 | 0,5±0,015 |
| PRB-959-2 | 7 | >16,7 | 0,8 | 12,5 | 25,1±0,753 |
| PRB-959-3 | 9 | >16,7 | 0,8 | 8,1 | 24,9±0,747 |
| PRB-959-4 | 14 | >16,7 | 5,9 | >12,5 | 8,3±0,249 |
| PRB-959-5 | 19 | >16,7 | 5,6 | >12,5 | 5,4±0,162 |
| PRB-959-6 | 21 | >16,7 | 5,9 | >12,5 | 6,1±0,183 |
| PRB-959-7 | 26 | >16,7 | 5,4 | >12,5 | 6,7±0,201 |
В панели PRB 959 только первая сыворотка (959-1) определена как отрицательная во всех тест-системах. В ней не выявлены АТ к ВИЧ, АГ р24 ВИЧ-1 и РНК-ВИЧ. Все остальные образцы панели в тест-системе «DIA-HIV-Ag/Ab» определены как положительные с высокими значениями соотношения ОП/ГЗ.
Таблица 8: Оценка «DIA-HIV-Ag/Ab» на панели сывороток PRA 203
| № образца панели | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| Abbott Monoclonal HIV Ag | Dupont HIV Ag | Organon Teknik HIV Ag | IVCOMBI.CE 4th Generation | DIA-HIV-Ag/Ab | |
| PRА203-01 | 4,3 | 5,7 | 16,8 | 2,3 | 2,3±0,069 |
| PRА203-02 | 12,2 | 6,2 | 16,4 | 4,1 | 20,5±0,615 |
| PRА203-03 | 6,0 | 8,7 | 9,3 | 1,4 | 4,2±0,126 |
| PRА203-04 | 3,0 | 3,1 | 4,1 | 1,9 | 3,5±0,106 |
| PRА203-05 | 4,9 | 1,2 | 8,2 | - | 27,9±0,837 |
| PRА203-06 | 1,3 | 1,3 | 1,5 | 1,0 | 25,8±0,774 |
| PRА203-07 | 5,7 | 2,8 | 12,1 | 2,9 | 25,9±0,777 |
| PRА203-08 | 1,5 | 1,0 | 2,0 | 3,0 | 27,5±0,825 |
| PRА203-09 | 0,5 | 0,2 | 0,2 | 0,4 | 0,8±0,024 |
| PRА203-10 | 12,2 | 9,6 | 25,3 | 3,6 | 15,3±0,459 |
| PRА203-11 | 3,1 | 3,9 | 5,8 | 2,4 | 2,8±0,086 |
| PRА203-12 | 3,5 | 2,9 | 6,6 | 1,6 | 24,9±0,747 |
| PRА203-13 | 2,1 | 1,1 | 2,4 | 1,2 | 9,3±0,279 |
| PRА203-14 | 0,9 | 0,7 | 2,5 | 0,4 | 2,5±0,075 |
| PRА203-15 | 2,5 | 2,8 | 5,9 | 3,3 | 2,8±0,084 |
| PRА203-16 | 1,8 | 1,4 | 3,7 | 1,1 | 28,5±0,855 |
| PRА203-17 | 6,3 | 4,0 | 6,1 | 2,5 | 17.5±0,525 |
| PRА203-18 | 2,4 | 0,8 | 2,3 | 1,7 | 24.8±0,744 |
| PRА203-19 | 0,5 | 0,2 | 0,3 | 0,4 | 0.3±0,009 |
| PRА203-20 | 17,0 | 9,1 | 26,4 | 4,6 | 10.7±0,321 |
Все 18 положительных образцов панели в тест-системе «DIA-HIV-Ag/Ab» определены положительными, а образцы 9 и 19 – отрицательными. Способность тест-системы выявлять АТ к ВИЧ1,2 в сравнении с её коммерческими аналогами двух ведущих мировых производителей (тест-система I и II) представлены в табл. 9. Для тестирования использована стандартная панель «СПП-ВІЛ 1/2».
Тест-система «DIA-HIV-Ag/Ab» и тест-система I выявила все образцы панели, содержащие АТ к ВИЧ-1 и ВИЧ-2, определяют как положительные, тогда как тест-система II не выявляет две сыворотки с АТ к ВИЧ-2.
Таблица 9: Оценка «DIA-HIV-Ag/Ab» на панели сывороток «СПП-ВІЛ ½» в сравнении с её аналогами
| № образца панели | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||
|---|---|---|---|
| №1 | №2 | DIA-HIV-Ag/Ab | |
| 1 | 7,3 | 11,1 | 25,1±0,753 |
| 2 | 17,6 | 11,2 | 22,0±0,66 |
| 3 | 17,3 | 11,2 | 24,7±0,741 |
| 4 | 17,4 | 11,1 | 23,9±0,717 |
| 5 | 4,8 | 11,6 | 22,8±0,684 |
| 6 | 6,1 | 10,0 | 22,5±0,675 |
| 7 | 7,7 | 10,6 | 22,8±0,684 |
| 8 | 13,4 | 11,4 | 22,2±0,666 |
| 9 | 16,8 | 11,6 | 23,4±0,702 |
| 10 | 17,6 | 11,2 | 22,9±0,687 |
| 11 | 16,3 | 11,2 | 23,3±0,699 |
| 12 | 17,1 | 11,2 | 25,6±0,768 |
| 13 | 17,1 | 11,5 | 23,2±0,696 |
| 14 | 18,7 | 10,2 | 23,8±0,714 |
| 15 | 5,7 | 10,9 | 23,4±0,702 |
| 16 | 9,2 | 11,4 | 24,6±0,738 |
| 17 | 11,3 | 10,4 | 23,7±0,711 |
| 18 | 16,1 | 10,6 | 22,9±0,687 |
| 19 | 17,0 | 0,5 | 22,1± |
| 20 | 15,6 | 0,4 | 21,2± |
Для оценки чувствительности тест-системы протестированы 837 неразведённых сывороток ВИЧ-инфицированных пациентов. Все сыворотки определены как положительные в тест-системе «DIA-HIV-Ag/Ab», при этом в 9 образцах зарегистрированы АТ к ВИЧ в низких титрах (табл. 10).
Таблица 10: Оценка «DIA-HIV-Ag/Ab» и её аналогов с использованием неразведенных сывороток ВИЧ-инфицированных пациентов, содержащих АТ к ВИЧ в низких титрах
| № сыворотки | Тест-системы, ОП/ГЗ | ||
|---|---|---|---|
| №1 | №2 | DIA-HIV-Ag/Ab | |
| 1 | 1,4±0,042 | 4,3±0,126 | 4,3±0,129 |
| 2 | 0,4±0,012 | 1,9±0,042 | 3,3±0,099 |
| 3 | 0,69±0,021 | 1,4±0,042 | 1,6±0,048 |
| 4 | 0,77±0,023 | 9,4±0,282 | 1,4±0,042 |
| 5 | 17,6±0,528 | 11,5±0,345 | 3,1±0,093 |
| 6 | 14,9±0,447 | 10,0±0,30 | 5,0±0,150 |
| 7 | 5,9±0,177 | 5,4±0,162 | 4,4±0,132 |
| 8 | 3,96±0,119 | 3,6±0,108 | 3,7±0,111 |
| 9 | 9,69±0,291 | 4,2±0,126 | 7,4±0,222 |
Тест-система «DIA-HIV-Ag/Ab» определяет все 9 исследуемых сывороток как положительные, однако соотношение ОП/ГЗ при этом невысокое (от 1,4 до 7,4). Аналогичные результаты получены для тест-системы II, а в тест-системе I три сыворотки из девяти определяются как отрицательные (ложноотрицательные результаты).
Специфичность тест-системы «DIA-HIV-Ag/Ab» определяли с использованием стандартных панелей сывороток, не содержащих маркёров ВИЧ: «СПН-ВІЛ1/2» из 12 образцов и «Стандарт АТ(-) ВИЧ-МБА» из 20 сывороток. Все образцы сывороток определялись как отрицательные. Проанализированы 2487 донорских сывороток, полученных из станций переливания крови Украины, ложноположительных результатов не наблюдалось.
По результатам анализа донорских сывороток и образцов стандартных панелей специфичность тест-системы составила 100%.
С 2012 года «DIA-HIV-Ag/Ab» используется в станциях переливания крови (СПК) Украины. По отчётам лабораторий СПК за 1-й квартал 2013 года с использованием этой тест-системы исследовано 134486 образцов донорской крови, специфичность составила 99,8%.
Проведённые исследования продемонстрировали высокое качество тест-системы и соответствие её диагностических характеристик современным требованиям для ИФА тест-систем, применяемых для скрининга донорской крови. Аналитическая чувствительность тест-системы по выявлению Международного стандарта АГ р24 ВИЧ-1 (NIBSC, Великобритания) составила 1 МЕ/мл. По требованиям CTS (2009/108/ЕС) Комиссии Европейского Союза от 3 февраля 2009 г, аналитическая чувствительность для СЕ-маркированных ИФА тест-систем по выявлению Международного стандарта природного АГ р24 ВИЧ-1 должна составлять не более 2 МЕ/мл [5]. Аналитическая чувствительность тест-системы по выявлению АГ р24 ВИЧ-1 (ABI, США) составила 2,5 пкг/мл. При исследовании тест-системы с использованием панели «Стандарт АГ(+) ВИЧ-1 р24» (МБА, Россия) чувствительность набора составила 20 пкг/мл. Различия в чувствительности по определению АГ р24 ВИЧ-1 (2,5 и 20 пкг/мл) обусловлены различиями источника АГ и степени очистки используемых стандартов, и особенностями специфичности используемых в тест-системе МКАТ к АГ р24 ВИЧ-1. В паспортах на вышеуказанные стандарты указано, что р24 ВИЧ-1 (ABI, США) выделен из культуры клеток НUТ78, инфицированных вирусом HIV-1IIIB, очищен при помощи иммуноафинной хроматографии с использованием МКАТ к HIV-1IIIB p24 и HPLC, степень чистоты составляет 95%. Поставляется в буфере PBS без добавлений каких-либо белков, что позволяет оценить концентрацию и чистоту препарата. Стандарт АГ р24 ВИЧ-1 представляет собой набор из 10 образцов сыворотки донора, в которые внесён культуральный цельновирионный инактивированный АГ р24 ВИЧ-1 (штамм ЭВК/ИРА-3) в различных концентрациях. Сведения об очистке АГ не приведены. Концентрация АГ в каждом образце рассчитана калибровкой в ИФА относительно стандарта АГ р24 ВИЧ-1 фирмы «Bio-Rad» (США). Значительные различия национальных референс-препаратов АГ р24 ВИЧ-1 отметили эксперты ВОЗ при разработке 1-го Международного стандарта р24 ВИЧ-1 [6]. При количественной оценке содержания Международного стандарта р24 ВИЧ-1 относительно различных референс-АГ р24 ВИЧ-1, выраженных в пкг/мл (включенных в качестве калибраторов в 14 тест-систем различных производителей), установлено, что 1 МЕ/мл Международного стандарта р24 ВИЧ-1 соответствует диапазону концентраций различных стандартов от 2,4 пкг/мл до 26,9 пкг/мл. Различия делают актуальным задачу корректной калибровки национальных стандартов р24 ВИЧ-1 относительно Международного стандарта, а также разработки единых стандартов для каждого субтипа ВИЧ.
Продемонстрирована высокая способность тест-системы «DIA-HIV-Ag/Ab» определять АТ к ВИЧ различных групп и субтипов (ВИЧ-1: А, В, С, Е, О, ВИЧ-2).
Чувствительность тест-системы при исследовании образцов стандартных панелей и неразведенных сывороток от ВИЧ-инфицированных пациентов составила 100%. Тест-система выявляет АТ к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в низких титрах и с более высокими сигналами, чем коммерческие аналоги ведущих мировых производителей.
Разработанная тест-система способна диагностировать ВИЧ-инфекцию на более ранних этапах заболевания, чем её коммерческие аналоги.
Разработанная тест-система обладает высокой специфичностью: при испытаниях в условиях предприятия - 100% (2519 образцов), в клинических лабораториях - 99,8% (134486 исследований).
Следует отметить высокую стабильность и точность тест-системы: показатель межсерийных различий коэффициента позитивности для 12 выпущенных промышленных серий тест-системы составил 5,87% (CV).
Тест-система «DIA-HIV-Ag/Ab» по диагностическим показателям качества (чувствительность и специфичность) отвечает современным международным требованиям к данному виду продукции и может быть использована в масштабных программах проведения скрининга донорской крови и подтверждения результатов исследований на ВИЧ.
Литература
- WHO. UNAIDS. Global report. Global summary of the AIDS epidemic. www.unaids.org
- ВИЧ-инфекция. Информационный бюллетень № 36 // Федеральный научно-методический центр по профилактике и борьбе со СПИДом. Москва. – 2012. – Инф. бюл. № 36. www.hivrussia.org
- ВІЛ-інфекція в Україні. Інформаційний бюлетень // К., МОЗ. − 2012. − №38. − 37 с.
- Практичний посібник з імуноферментного анализу /Іванська Н.В., Кислих О.М., Максименок О.В. та ін./ під ред. Гураля А.Л. та Співака М.Я. – K.: Діапроф-Мед, ДМП «Полімед», 2003. – 51 с.
- COMMISSION DECISION of 3 February 2009, amending Decision 2002/364/EC on common technical specification for in vitro-diagnostic medical devices (notified under document number C(2009)565), text with EEA relevance, (2009/108/EC) // Official Journal of European Union, 2009- Vol. 10, № 2. – P. 34-49.
- Garrett A.J., Heath A.B. Report of a collaborative study on proposed HIV-1 p24 antigen reference reagents // EXPERT COMMITTEE ON BIOLOGICAL STANDARDIZATION, Geneva, 13-20 October 1992 – P. 1-22.